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2×藍色通用SYBR Green qPCR 預混液
分類：熒光定量系列
品牌：SiDoTek
應用：
貨期：下單后3天內(nèi)
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 目錄價 |
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SDMR3-2a
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2×藍色通用SYBR Green qPCR 預混液
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5ml
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298.00 |
- 產(chǎn)品介紹
- 技術文章
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SiDoTek™ 2×Blue Universal SYBR qPCR Master Mix
2×藍色通用SYBR Green qPCR 預混液
目錄號：SDMR3-2a
儲存條件：-30 ~ -15℃避光保存2年，≤0℃避光運輸
產(chǎn)品內(nèi)容：
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規(guī)格 SDMR3-1a |
規(guī)格 SDMR3-2a |
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2× Blue Universal SYBR qPCR Master Mix |
1 mL |
5×1 mL |
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DNase-free Water |
1 mL |
5×1 mL |
產(chǎn)品簡介
2× Blue Universal SYBR qPCR Master Mix是使用SYBR Green I 嵌合熒光法進行qPCR的2×試劑，顏色為藍色，具有加樣示蹤的作用。其核心組分Taq DNA Polymerase是基于抗體法封閉的熱啟動DNA聚合酶，可以有效抑制低溫條件下的非特異性擴增，同時配以針對qPCR優(yōu)化的反應Buffer體系，非常適合用于高特異性、高靈敏度的qPCR檢測反應，可以在較寬的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標準曲線，從而實現(xiàn)對靶基因的實時檢測定量準確、重復性好、可信度高。本品主要成分包括化學修飾的Hot Start Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+、SYBR Green I和針對qPCR優(yōu)化的最適Buffer。另外，預混液體系中添加了特殊ROX Reference Dye，適用于不同品牌的qPCR 儀器。本產(chǎn)品使用便捷省時，配制反應體系時只需加入引物和模板即可擴增。
注意事項
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 請于使用前確保產(chǎn)品完全解凍，徹底混勻后短暫離心，置于冰上備用，建議全程冰上操作。
3. 反復凍融會影響產(chǎn)品性能，解凍后盡量在一個月內(nèi)使用完畢。
4. 本產(chǎn)品中含熒光染料SYBR Green I，使用中需注意避光操作。
5. 試劑使用前請上下輕輕顛倒混勻，請勿渦旋振蕩混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
6. 反應液的配制、分裝請使用新的一次性槍頭，盡量避免樣品間的交叉污染。
實驗流程
推薦體系：
1. 按照下表配置PCR反應體系（注：配置多個反應孔時，請為各組分預留10%的余量，以免移液損失。）
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試劑組份 |
20μL體系 |
50μL體系 |
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2× Blue Universal SYBR qPCR Master Mix |
10 μL |
25 μL |
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Forward Primer (10μM) |
0.4 μL* |
1 μL* |
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Reverse Primer (10μM) |
0.4 μL* |
1 μL* |
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模板DNA/cDNA |
X μL* |
X μL* |
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DNase-free Water |
Up to 20 μL |
Up to 50 μL |
*通常每條引物終濃度為0.2 μM，也可根據(jù)情況在0.1~0.4μM 間進行調(diào)整。
*微量體積加樣時誤差大，建議批量配制反應體系后分裝至八聯(lián)排管中，再將cDNA模板稀釋后加入對應的反應體系中，這樣可以有效提高實驗的重復性；如模板類型為未稀釋cDNA原液，使用體積不應超過qPCR反應總體積的 1/10。
2. 反應體系配好加入模板后，蓋好八聯(lián)排管蓋，充分渦旋混勻，離心，避免產(chǎn)生氣泡。全程操作需佩戴手套，盡量避免手指按壓管蓋中心位置。
兩步法反應程序設置參考如下：
標準程序
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Stage |
步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
Stage 1 |
預變性/酶激活 |
95 ℃ |
5 min |
1 |
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Stage 2 |
變性 |
95 ℃ |
15 sec |
40 |
|
退火/延伸/采集信號 |
60 ℃ |
40 sec* |
||
|
Stage 3 |
熔解曲線 |
儀器默認設置 |
1 |
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快速程序
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Stage |
步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
Stage 1 |
預變性/酶激活 |
95 ℃ |
5 min |
1 |
|
Stage 2 |
變性 |
95 ℃ |
2 sec |
40 |
|
退火/延伸/采集信號 |
60 ℃ |
20 sec* |
||
|
Stage 3 |
熔解曲線 |
儀器默認設置 |
1 |
|
*延伸時間請根據(jù)您使用的Realtime qPCR儀數(shù)據(jù)采集最短時間限制以及PCR產(chǎn)物長度自行調(diào)整。
*模板拷貝數(shù)較低時采用標準程序可提高數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性。
三步法反應程序設置參考如下：
標準程序
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Stage |
步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
Stage 1 |
預變性/酶激活 |
95 ℃ |
5 min |
1 |
|
Stage 2 |
變性 |
95 ℃ |
15 sec |
40 |
|
退火 延伸/采集信號 |
55-65 ℃ 72 ℃ |
10 sec 30 sec* |
||
|
Stage 3 |
熔解曲線 |
儀器默認設置 |
1 |
|
快速程序
