瓊脂糖凝膠制備操作規(guī)程

產(chǎn)品目錄號：SDMR5-1a

儲存條件：存放于室溫干燥、陰涼、避光處，避免曝露于直接日光下。

規(guī)格：100g粉末

產(chǎn)品簡介

SiDoTek™ 瓊脂糖，是一種科研級高純度PCR高分辨率瓊脂糖（High Resolution Agarose）。本產(chǎn)品是經(jīng)科研中心及各大實驗室測試和認證的產(chǎn)品。本品是標準熔點瓊脂糖，專為常規(guī)分離分析而設(shè)計，對小片段 DNA  具 有很高的分辨率，可以和聚丙烯酰胺相媲美，適宜分離 20 bp - 50000 bp DNA 片段。其特點是，具有超強的凝膠結(jié)構(gòu)，凝膠強度>＞1,400 g/cm²。同時，本品屬于低熔點和低凝固溫度的瓊脂糖產(chǎn)品，形成凝膠速度更快，因此推薦用于快速 DNA 凝膠提取方案。

瓊脂糖凝膠制備方法

瓊脂糖凝膠的配制，是分子生物學實驗室基礎(chǔ)操作之一。因此正確地制膠操作，決定了后續(xù)實驗成功完成的關(guān)鍵之一。制膠的大體流程有如下步驟：稱量、熔膠、倒膠、拔梳。

1. 配制適量的制膠專用的緩沖液。該緩沖液是根據(jù)后續(xù)電泳的需要，配置出合適濃度的緩沖液用于制膠及后續(xù)電泳。

注：如上所述，用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液是同一種緩沖液。

2. 根據(jù)制膠量及凝膠終濃度，在加有適量的電泳緩沖液（總液體量不宜超過三角錐瓶的 50%容量）的三角錐瓶中，加入準確稱量的瓊脂糖粉。

3. 放入微波爐中加熱溶解瓊脂糖，設(shè)置中火加熱至沸騰，保持膠液沸騰約 30 秒鐘，戴上防護手套，取出三角錐瓶，小心水平搖動三角錐瓶，重懸未溶解的顆粒，放回微波爐，再次用中火加熱 約1 分鐘，重復上述步驟，直至瓊脂糖粉的顆粒完全溶解。操作注意佩戴防護手套！

注：必須保證瓊脂糖顆粒完全溶解，此時瓊脂糖膠液應(yīng)該清澈均勻。否則，會造成電泳圖像模糊不清。加熱時如膠液劇烈沸騰發(fā)泡，應(yīng)立即停止加熱。在微波爐中的加熱時間不宜過長。

4. 加熱完畢的瓊脂糖膠液冷卻至 60℃左右，根據(jù)使用說明加入適量DNA染料溴化乙錠(EB)或GoldView溶液后備用。（也可將以上兩種DNA染料稀釋后直接加入樣品中使用，電泳成像效果更好）。

注：溴化乙錠是一種致癌試劑。使用含有溴化乙錠的凝膠及其制品時，請戴防護手套。

5. 將步驟4的瓊脂糖溶液倒入制膠模中，插上梳子。凝膠厚度一般在5mm左右，厚度依據(jù)模具調(diào)整。

注： 在制備比較高濃度的瓊脂糖凝膠時，完全溶解后的瓊脂糖溶液易形成很多細小的氣泡，氣泡會嚴重干擾制膠必須除盡。此時，在倒膠完成后，將制膠模具置桌面，上下輕磕幾下，氣泡即會被震出，同時，可用200微升的黃槍頭尖端吸走剩余氣泡。

6. 在室溫下靜置等待瓊脂糖凝膠凝固（大約 30分鐘－1小時），然后小心拔出制膠梳子，從模具中取出凝膠，放置于電泳槽中以備后續(xù)上樣和電泳。

注：凝膠若不立即使用時，請用保鮮膜將凝膠包好后置于 4℃保存，通常可保存 2～5 天，建議盡快使用或現(xiàn)用現(xiàn)制備凝膠，避免浪費。

瓊脂糖濃度與 DNA 分離范圍