SiDoTek™ First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(with dsDNase)

第一鏈反轉(zhuǎn)錄預(yù)混試劑盒 qPCR專用（含雙鏈特異性DNA酶）

目錄號：SDMR2-4a/5a

儲存條件：-30 ~ -15℃保存2年，≤0℃運輸

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品簡介

SiDoTek™ First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(with dsDNase)是一款含有基因組去除組分的第一鏈cDNA合成試劑盒，可高效去除RNA中的基因組DNA污染。4× Master SuperMix 中包含第一鏈cDNA合成所需的所有組分，使用時僅需加入RNA模板和水即可進行合成，使用本試劑盒獲得的cDNA可用于qPCR、普通PCR等實驗。

注意事項

1. 操作過程嚴格避免RNase污染。為保證反轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的RNA樣品。

2. 為避免樣品間交叉污染和氣溶膠污染，推薦在超凈臺或生物安全柜中進行反應(yīng)體系的配制,并使用帶濾芯的吸頭。

3. 5× gDNA Eraser Mix 、4× Master SuperMix 非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸頭外導(dǎo)致?lián)p失，用前請離心后再使用，并且避免試劑在吸頭外壁沾附而造成大量損失。

4. 請于使用前確保產(chǎn)品完全解凍，徹底混勻后短暫離心，置于冰上備用。反復(fù)凍融會影響產(chǎn)品的性能。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

實驗流程 （以20 μL反應(yīng)體系為例）

基因組DNA去除

用移液器輕輕吹打混勻，37℃反應(yīng)2min，立即置于冰上，或者繼續(xù)55℃反應(yīng)5min后置于冰上。（55℃反應(yīng)5min能充分失活dsDNase，后續(xù)加入的4× Master SuperMix中含有DTT也能抑制dsDNase的活性）

配制第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系

1.試劑配置

2.輕柔吸打混勻。

3.反應(yīng)程序設(shè)置

*如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，可將反應(yīng)溫度提高到55℃，有助于提高產(chǎn)量。

4.該產(chǎn)物可直接用于第二鏈的合成或qPCR擴增反應(yīng)，請在-20℃保存產(chǎn)物，并在半年內(nèi)使用，長期存放建議分裝后在-80℃保存。做qPCR時，建議取1/10 ~ 1/5 體積(即2 ~ 4 μl)的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為PCR模板。豐度高的可以酌情適當(dāng)稀釋cDNA后使用。cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融。