SiDoTek™ 2×Fast Pfu Master Mix 

2×快速高保真預(yù)混液

目錄號(hào)：SDMR1-5a/SDMR1-8a

儲(chǔ)存條件：-30 ~ -15℃保存2年，≤0℃運(yùn)輸

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2×Fast Pfu Master Mix包含2×Fast Pfu DNA Polymerase、dNTP、Mg²⁺及經(jīng)過(guò)優(yōu)化的預(yù)先配制成2倍濃度的PCR反應(yīng)緩沖體系，其擴(kuò)增效率高，擴(kuò)增速度快，具有高保真性和高特異性，僅需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，減少了繁瑣的試驗(yàn)操作，提高了實(shí)驗(yàn)操作效率和結(jié)果的復(fù)現(xiàn)性。2×Fast Pfu Master Mix (Dye Plus)擴(kuò)增產(chǎn)物可以直接進(jìn)行電泳，產(chǎn)品如用于克隆，則需經(jīng)膠回收目標(biāo)尺寸的PCR產(chǎn)物，同時(shí)純化去除PCR產(chǎn)物中的染料。兩種產(chǎn)品的PCR產(chǎn)物均為平末端，可用于高保真PCR，基因定點(diǎn)突變，平端克隆，復(fù)雜模板，長(zhǎng)片段擴(kuò)增等。

產(chǎn)品特點(diǎn)

高保真:具有同Pfu酶相同的保真度，保真度為普通Taq酶的10倍左右。

快速:Fast Pfu酶的擴(kuò)增速度為普通Pfu酶擴(kuò)增速度的數(shù)倍，72℃保溫30S可延伸1kb以上。

靈敏:可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出特定基因片段，對(duì)DNA模板需求量低，擴(kuò)增靈敏。

快捷:本產(chǎn)品將PCR反應(yīng)所必需的試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系的配制。

便利:本產(chǎn)品在10u1,25ul或50ul體系全部適用，依據(jù)需求靈活選擇。

注意事項(xiàng)

1. 其擴(kuò)增產(chǎn)物為平端可直接克隆于平端載體中，但不能直接用T/A克隆方式克隆

2. 請(qǐng)于使用前確保產(chǎn)品完全解凍，徹底混勻后短暫離心，置于冰上備用，反復(fù)凍融會(huì)影響產(chǎn)品的性能。

3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用建議

本產(chǎn)品中的Fast Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端，無(wú)3'端"A"突出，其PCR產(chǎn)物的克隆有兩種方案:

1、PCR引物進(jìn)行5'端加磷酸修飾或?qū)?/span>PCR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中。

2、將產(chǎn)物3'末端加A后再與T載體連接。

由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起引物從3'端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加引物的長(zhǎng)度，理想的引物長(zhǎng)度為20-30bp 堿基。另外為了減少由3'-5'外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配制反應(yīng)體系。

實(shí)驗(yàn)流程 

推薦的PCR反應(yīng)體系：

*通常每條引物終濃度為 0.2~0.4 μM，效果不佳時(shí)也可在 0.1~1 μM 間進(jìn)行調(diào)整。

*基因組DNA推薦用量為10~400ng，模板為質(zhì)?；虿《?/span>DNA時(shí)，推薦用量為10pg~20ng。

反應(yīng)程序設(shè)置

* 退火溫度需要根據(jù)引物的 Tm 值進(jìn)行調(diào)整，一般設(shè)置成低于引物 Tm 3~5℃。